目前美洲出現了寨卡(Zika)病毒的爆發流行。2014年2月,智利發現了首例寨卡病毒感染者。2015年5月,巴西開始出現寨卡病毒感染,目前已有24個國家和地區有疫情報道,其中22個在美洲,歐洲多國也有報道,有蔓延全球之勢。寨卡(Zika)病毒屬于黃病毒科中之黃病毒屬的RNA病毒,與乙型腦炎病毒、登革熱病毒、西尼羅病毒近親。若想深入研究該病毒,首先需要提取該病毒的核酸。本文將介紹一種快速提取該病毒核酸的方法, 為該病毒的研究,診斷,及疫苗的研究提供最有效的幫助。
寨卡病毒的主要載體伊蚊(Aedes mosquito)是世界體型最大的蚊子一種,存活在除南極洲之外的世界所有大洲。因此,寨卡病毒已經遍布南非、墨西哥、非洲、東南亞和太平洋島國。
若想深入研究該病毒,首先需要提取該病毒的核酸。本文將介紹一種快速提取該病毒核酸的方法, 為該病毒的研究,診斷,及疫苗的研究提供最有效的幫助。
1. Kurabo核酸提取儀工作原理及優勢:
病毒的核酸提取,傳統的提取方法費時,費力,而使用市場上的很多其它品牌核酸提取儀也價格昂貴,得率低。KURABO公司的核酸提取純化儀Quickgene 810和mini 80,第一大優勢是其核心技術,KURABO專利設計的80um多孔膜, 此膜厚度是傳統硅膠膜或樹脂膜的1/12.5,比表面積更大,這種多孔膜可以選擇性的吸附核酸,在低壓下可完成高純度的提取工作,所用時間更短,效率更高。第二大優勢是該儀器無需額外的離心操作,優于任何其它品牌的核酸提取儀,避免了對樣品的損傷,同時操作方便,快速,使得樣品回收率更高。
2. 方法:
使用Kurabo Quickgeen系列的的RT-S2試劑盒,解決了用戶繁瑣的配置試劑及準備各種管子的麻煩,試劑盒已包括如下部分:LRT(裂解液), SRT(溶解液),WRT(清洗液), CRT(洗脫緩沖液),廢液管,回收管,等。
3. 步驟:
操作過程非常簡單,只需幾個步驟,取2ml的微量管,加入150uL血清并按如下步驟進行:
將上述預處理樣品轉入Kurabo多孔膜過濾柱,放置到Quickgene 810或mini80 上,通過機器自動(Quickgene810)或手動 (mini80) 加如WRT緩沖液,并加壓排液, 最后加入50uL CRT將RNA 洗脫到回收管,即得到RNA純樣品,4℃保存備用.
4. 結論:
通過上述方法可快速進行寨卡病毒的核酸提取,滿足了下游進一步研究的需要。